常用诊断用酶,测定ATP甘油醛-3磷酸偶联反应的生命科学研究,并可直接用于测定磷酸甘油酸激酶的活力;通过活性检测可推断是否患有急性肝炎、酒精性肝病、肝硬变、慢性肾盂肾炎、多发性骨髓病、肺炎、肺气肿等疾病;对体内缺乏此酶、糖代谢有问题的病人,食用含此酶的药物可缓解病情。
医药;生命科学研究
路线1:兔肌提取法
- 原料:兔肌
- 步骤:经KOH提取、硫酸铵分级分离,再经Sephadex G-50柱层析和CM-Sephadex柱层析,最后硫酸铵沉淀、重结晶而得。
路线2:基因工程重组法
- 基因序列:编码3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的碱基序列如SEQ ID NO.2所示;氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
- 酶制备步骤:
- 利用PCR技术扩增SEQ ID NO.2所示的碱基序列;
- 将SEQ ID NO.2所示的碱基序列克隆入载体质粒中,构建3-磷酸甘油醛脱氢酶的表达载体;
- 将表达载体转化入大肠杆菌感受态菌体中得到重组菌体,依次经扩大培养、诱导表达、收集菌体、破碎菌体和纯化蛋白过程得到3-磷酸甘油醛脱氢酶蛋白;
- 鉴定:重组菌株Ecoli BL21-pET21a-GPR表达的3-磷酸甘油醛脱氢酶蛋白可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定(M泳道为protein marker;1号泳道为目标蛋白)。
路线3:多克隆抗体制备
- 步骤:
- 以氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的3-磷酸甘油醛脱氢酶为抗原,免疫小鼠制备抗血清;
- 纯化抗血清得到3-磷酸甘油醛脱氢酶的多克隆抗体。