化学合成; 合成拉科酰胺的主要中间体
医药
路线1：酶促转化消旋2-氨基-3-甲氧基丙酰胺
- 步骤：将20g苍白杆菌CICC10363湿菌体和20g无色杆菌CICC10400湿菌体加入到1000mL含60g消旋2-氨基-3-甲氧基丙酰胺（质量浓度6%）、0.5g/L吐温-80、pH11的转化液中；55℃酶促反应5h；反应结束后4000r/min离心15min除去菌体细胞；上清液用6mol/L盐酸调pH5.0，加入5克活性炭，搅拌升温到70℃脱色，抽滤；脱色液真空浓缩析出沉淀，冷却结晶，真空抽滤，分别用纯水淋洗，80%乙醇搅洗，烘干。
- 收率：46.6g（底物总转化率约84%）
- 光学纯度：ee=98.2%
路线2：酶促拆分N-乙酰基-O-甲基-D,L-丝氨酸
- 步骤：将3g N-乙酰基-O-甲基-D,L-丝氨酸溶解在30mL软化水中，用5N氢氧化钠溶液调节pH至7.5-8.0；加入50mg来自猪肾的Acylase I（EC：3.5.1.14），25℃温和搅拌过夜；用浓HCl调节pH至2.7，将水溶液注入pH3.8调节的Dowex TM 50WX4-50离子交换树脂（50mL）中；所得物质用pH2.4的水洗脱；水溶液真空蒸发至干。
- 条件：25℃，酶促反应，拆分外消旋体
- 收率：1.5g（50%）
路线3：ACL消旋酶与PepB催化α-氨基-β-甲氧基丙酰胺转化
- 步骤：将ACL消旋酶（Locus：E01594，3.0mg）和PepB（Locus：D84499，1.2mg）加入到含2mM 5'-磷酸吡哆醛（PLP）、0.1M磷酸钾缓冲液（KPB，pH9.0）、0.5mol/L α-氨基-β-甲氧基丙酰胺4的20ml水溶液中；38℃孵育18小时；通过HPLC（Crownpak CR（+）柱，0.5ml/min流速，50mM HClO4溶剂系统，210nm检测）跟踪反应进程；反应混合物通过三氯乙酸脱蛋白和Dowex-X8（H+）柱色谱分离得到O-甲基-L-丝氨酸5；将7.98mmol（950mg）O-甲基-L-丝氨酸5从水-甲醇-异丙醇-醚中重结晶。
- 条件：38℃，酶促反应
- 收率：99.9%
- 光学纯度：大于99.9%
- 产物性质：白色晶体，熔点211-213℃（分解）；1H NMR（400MHz，D2O）：δ3.24（s，3H），3.78-3.81（m，1H），3.83（dd，J=3.5,9.8Hz，1H），4.01（dd，J=6.1,9.8Hz，1H）；13C NMR（100MHz，D2O）：177.3（CO），76.5（CH2），60.2（CH），56.7（OCH3）；元素分析：C4H9NO3计算值C 40.32、H 7.58、N 11.75，实测值C 40.35、H 7.54、N 11.77；ESI-MS（m/z）：120.1230 [M+H]+
