细胞色素C溶液

• 化学性质 细胞色素Ｃ系自猪或牛心中提取的细胞色素Ｃ的水溶液，为深红色的澄清溶液，它对于干燥、热和酸稳定。易溶于水，呈碱性。等电点Ph为10.2～10.8。氧化型水溶液呈深红色，在饱和硫酸铵中可溶解，还原型水溶液呈桃红色，溶解度较小。它是生物氧化的一个非常重要的电子传递体。通常外源性的细胞色素Ｃ不能进入健康细胞，但在缺氧时，细胞膜的通透性啬，细胞色素Ｃ便有可能进入细胞及线粒体内，增强细胞氧化，提高氧的急救和辅助治疗。 细胞色素Ｃ注射液为细菌色素Ｃ的灭菌水溶液，内含等量的稳定剂双甘氨肽和抗氧化剂亚硫酸氢钠和亚硫酸钠，为橙红色的澄明液体。 注射液用细胞色素Ｃ加适宜的赋形剂与抗氧剂，经冷冻干燥制得的无菌制品，为桃红色冻干块状物，易溶于水。
• 细胞色素C可用为细胞呼吸激活剂。常用于组织缺氧的急救和辅助用药。适用于治疗由脑缺氧、心肌缺氧和其他组织缺氧引起的一系列症状。也用于促进受损肝细胞再生、骨髓造血机能修得，显著减轻由放疗引起的白细胞减少症。但是有时有局部痉挛、皮疹、发热、口渴、暂时性休克和变态反应等症状应立即停药。使用前或治疗终止再用药时应进行过敏试验，阳性反应者禁用，细胞色素C注射液本身无毒素，但制剂不纯时，易混有热源，它是异性蛋白，可能会引起过敏反应。LD 50 3～6kg。

医药

方法一、以猪心为原料的提取法 绞碎、提取、压滤 取新鲜或冷冻猪心，洗净，去血块、脂肪和肌腱等，切条，用绞肉机绞碎。称取心肌碎肉，加水1.5倍并搅拌均匀，用硫酸(1mol/L)调节之ph4左右常温下不断搅拌，使之提取2h，压滤，取滹液用氨水(1mol/L)中和酸度，使ph4为6.2，离心，分离取清液。心渣再加等量蒸馏水同上重复提取一次，合并两次上清液。 新鲜猪心 绞碎 →碎肉 H 2 SO 4 → 提取；压滤 滤液 NH 3 ·H 2 pH6.2 → 分离 提取液 中和、吸附、洗脱提取液加入氨水（2mol/L）调到pH7.5，在水浴中静止沉淀杂蛋白，吸取上层清液，每升提取液加入10g沸石，在不断搅拌下，使之吸附40mim，静置，弃去上层清液。用蒸馏水洗涤吸附有细胞色素C的沸石3次，氯化钠（0.2%）洗涤4次，再用蒸馏水洗至洗液澄清。过滤抽干，装入色谱柱中用硫酸铵（25%）溶液洗脱，收集洗脱液。 提取液 NH 3 ·H 2 O；沸石 → 中和；吸附 吸附物 （NH 4 ） 2 SO 4 (25%) → 洗涤 洗脱液 盐析、洗脱、透析 洗脱液加入固体硫酸铵使浓度达到45%，使杂蛋白完全析出后，过滤。收集滤液，每升滤液中缓缓加入三氯乙酸（20%）25ml,边加边搅拌，待细胞色素C沉淀完全析出后，离心收集细胞色素C沉淀。将沉淀溶于蒸馏水，装入透析袋中，先用常水（指自来水）透析、再用蒸馏水透析到无硫酸根离子为止，过滤，得细胞色素C粗品溶液。 洗脱液 （NH 4 ） 2 SO 4 →滤液 CCl 3 CCOH → 浓缩 沉淀物 蒸馏水 → 透析 粗品溶液 吸附、洗脱、透析 细胞色素C粗品溶液通过已处理好的AmberliteIRC-50（NH + 4 ）树脂柱吸附，然后将树脂移入大烧杯中，用水洗涤到澄清，再分别上柱，用磷酸氢二钠（0.6mpl/L）和氯化钠（0.4mpl/L）混合液洗脱，洗脱速度要慢，流速一般为2ml/min。洗脱液用蒸馏水透析至无氯离子为止，得细胞色素C精品溶液，按猪心质量计算，收率为100～150mg.kg，含量大于20mg/ml。 粗品溶液工 Amberlinte;IRC-50树脂 → 吸附 吸附物…… Na 2 HPO-NaCl → 洗脱 洗脱液 蒸馏水 → 透析 精品溶液 除热原、冻干 取相当于1.5g的细胞色素C精品液，加亚硫酸氢钠200mg，搅拌使之完全溶解，再加双甘肽1.5g混合均匀，用2g/L氢氧化钠（2%）调节pH6.4左右,加注射用水100ml，过滤、除热原，6号垂熔漏斗过滤，抽检测含量合格后，灌注，冷冻干燥，即得每支含15mg细胞色素C的制剂。 精品溶液 NaHSO 3 ，双甘肽 → 除热原、冻干 细胞色素C制剂 方法二，以新鲜酵母为原料的提取法及工艺过程 破壁、分离 在搅拌下将等量的沸水加入到新鲜压干酵母中，加热至80～85 5 C，然后迅速将2倍量的冰块加至酵母中，骤然冷却至30 0 C以下，使细胞壁完全破裂，过滤分离，得酵母湿饼或浊液。 新鲜压榨酶母 等量沸水；冰块 → 破壁；分离 湿饼或浊液 提取、净化将酵母湿饼或浊液中加入常水0.65倍及硫酸铵0.075倍量，搅拌使之完全溶解，用氨水调节pH至8, 在搅拌下提取3h或静置提取12～15h，过滤，得净化液。 湿饼或浊液 （NH 4 ） 2 SO 4 → 提取;净化 净化液 吸取、洗脱 取净化液加入3.6～4倍的常水，用盐酸调节pH至6.8～7，然后通过弱酸性丙烯酸系阳离子交换树脂112×1柱（80～100目）进行吸附，在树脂上有红色吸附物。挖出红色吸附物，按色泽深浅分别用常水、蒸馏水及pH的硫酸铵溶液（0.05mol/L）洗涤，再按照色泽由深到浅，自上而下重新过柱，力求紧实，再用pH8的硫酸铵（13%）溶液洗脱，得粗品洗脱液。 净化液 112×1树脂柱 → 吸附 吸附物 （NH 4 ） 2 SO 4 → 洗脱 洗脱液 过滤、沉淀、吸附、洗脱、冻干将洗脱液冷却至2～5 0 时，加入固体硫酸铵，搅拌溶解，使其浓度达到80%～85%饱和度（每毫升洗脱约0.41g的硫酸铵），使pH为5～5.5，在２～５ 0 的条件下静置1.5～2h，离心，过滤，得滤液。于5 0 以下，加入约滤液0.03～0.05 倍的三氯乙酸（ 200g/L即２０％），使之沉淀，待沉淀完全后，过滤。收集沉淀物用新鲜蒸馏水使之充分的溶解，过滤，取清液加３０～４０倍的蒸馏水稀释，调节pＨ为6.8～7，过滤除去残渣。滤液通过（１１２cm×1cm） 树脂柱（１２０～１４０目）进行吸附，得红色吸附物，挖出红色树脂吸附物，用新鲜蒸馏水充分洗涤至洗液不浑浊。重新上柱，力求紧实，用pＨ8.2的磷酸氢二钠（0.06mol/L）氯化钠（0.34mol/L）混合液，以１５～２