生化和分子生物学研究;小牛胸腺DNA(CT-DNA)是一种天然的DNA广泛用于研究DNA绑定抗癌剂和DNA绑定代理,调节DNA结构和功能。
用于药物与DNA相互作用的光谱学研究;用于聚合酶分析实验及其它分子生物学实验
路线1:小牛胸腺DNA提取
- 步骤1: 取新鲜(或冰冻)的小牛胸腺,除去血水和结缔组织,在冰浴上切成小块,称取20g,加入2倍体积的0.1mol/L氯化钠-0.05mol/L,pH=7.0柠檬酸钠缓冲溶液,于组织捣碎机上高速匀浆5分钟。
- 步骤2: 组织糜用转速为3000r/min的离心机离心15分钟,将沉淀用50mL上述缓冲溶液洗涤2次,洗涤时用匀浆器研磨洗涤,每次如前离心。
- 步骤3: 向后得到的细胞核沉淀中加入6倍体积的10%氯化钠溶液,充分搅匀置冰箱中过夜,以充分提取DNP,溶液为粘稠状。
- 步骤4: 将所得的半透明粘稠状液体,用滴管慢慢注入冷蒸馏水中,边加边轻轻搅动(NaCl的终浓度为0.14mol/L),这时有白色丝状物——核蛋白析出,在冰箱中静置数小时,收集沉淀。
- 步骤5: 将沉淀物再溶于4倍体积的10%氯化钠溶液中,迅速搅拌以加速溶解。加入1/2体积的氯仿-异戊醇混合液,剧烈振荡5分钟左右,用转速为3000r/min的离心机离心15分钟,得三层:上层为含有DNA和DNA核蛋白的水层,下层为氯仿-异戊醇的有机溶剂层,变性蛋白质介于两层之间。
- 步骤6: 吸出上面的水层,再用氯仿-异戊醇如前进行脱蛋白,直至界面处不再出现变性蛋白质为止。
- 步骤7: 后吸出上清液并将其注入两倍体积的95%乙醇中,用玻璃棒搅起白色纤维状DNA沉淀,沥干,用80%乙醇洗涤,后用少量无水乙醇洗涤。尽量沥干乙醇后,铺开在表面皿上。置于真空干燥器内干燥,即得白色纤维DNA钠盐。