9004-07-3 α-糜蛋白酶

运输信息：冰袋运输。危险描述：WGK Germany:3，RTECS号:GC3050000，F:3-10，TSCA listed，海关编码:35079090，存储类别:11 - 可燃固体，危险性类别:急性毒性 类别4 经口，危害水生环境-急性危害 类别1，眼部刺激 类别2，呼吸道致敏物 类别1，经皮刺激 类别2，特异性靶器官毒性-一次接触，类别3，毒害物质数据:9004-07-3(Hazardous Substances Data)

生命科学领域用于蛋白质的分解和消化；医药领域用于手术后创口或创伤愈合、抗炎及防止局部积血、水肿、扭伤血肿、乳房手术后局肿胀、鼻炎、中耳炎等；眼科手术中松解睫状肌韧带，减少膜破裂和视网膜损伤；生化研究中用于蛋白质的结构分析、分解和消化。

医药;生命科学;生化研究

路线1：牛胰提取法

• 原料处理：牛宰杀后1h内取胰脏，洗净去杂，浸入0℃冰冷0.125mol/L硫酸溶液中保存；绞碎胰脏成胰浆，加2倍量冰冷0.125mol/L硫酸，0℃冷室浸渍提取24h（每1-2h搅拌1次），滤渣再用1倍量同浓度冷硫酸重复提取，合并滤液。
• 分级盐析：滤液加硫酸铵至40%饱和度，冷室过夜，虹吸上清液，沉淀加硅藻土助滤，合并上清液与滤液；再加硫酸铵至70%饱和度，冷室过夜，弃上清液，沉淀过滤；沉淀用3倍冰水溶解，重复40%和70%饱和度硫酸铵分级沉淀，取第二次70%饱和度沉淀滤饼。
• 糜蛋白酶原结晶：滤饼用1.5倍冰水溶解，加0.5倍饱和硫酸铵溶液，5mol/L氢氧化钠调pH=5，25℃静置48h结晶，得粗糜蛋白酶原；粗品加7倍冰冷蒸馏水溶解，2.5mol/L硫酸调pH=2，酸洗滑石粉过滤，滤液加2倍饱和硫酸铵溶液，调pH=5，20-25℃静置4h结晶，得糜蛋白酶原结晶。
• 活化与精制：糜蛋白酶原结晶加3倍冰冷蒸馏水溶解，滴加硫酸溶液，加pH=7.6磷酸盐缓冲液和氢氧化钠维持pH=7.6，每100g糜蛋白酶原加5mg胰蛋白酶，5℃活化48h；0.5mol/L硫酸调pH=4，加硫酸铵至0.5kg/L盐析，过滤，沉淀用0.005mol/L硫酸溶解，加晶种20-25℃静置24h结晶，得糜蛋白酶结晶。
• 透析干燥：结晶加3倍蒸馏水溶解，装入透析袋，5℃水浴中用水连续透析2-3d；透析液冷冻减压干燥得成品。
• 收率：糜蛋白酶原粗制品按牛胰质量计收率5%-6%。