D-蛋氨酸主要用作生化试剂和营养增补剂,在化学合成和生命科学领域有应用;作为化学保护剂,可通过激活GABAA受体抑制神经元活性,与顺铂联用能减轻其毒性,在体内外研究中显示出保护哺乳动物免受顺铂诱导毒性的作用。
医药; 化学合成; 生命科学; 生化试剂; 营养增补剂
N-d-AAase活性测定法(用于D-蛋氨酸相关研究)
- 底物:N-乙酰-D-蛋氨酸
- 步骤:将N-d-AAase与N-乙酰基-D-蛋氨酸在4℃下孵育;随后加入含有d-氨基酸氧化酶(与辣根过氧化物酶偶联)、过氧化物酶(10 U/mL)、4-氨基安替比林(0.04 mg/mL)和苯酚(0.8 mM)的比色溶液混合物
- 检测:在520 nm波长下测量吸光度(OD)
- 酶活性单位定义:每分钟催化生成1 μmol D-蛋氨酸的量
- 蛋白质浓度测定:采用Bradford方法,以牛血清白蛋白为标准
- 动力学参数:通过将初始速率作为底物浓度的函数,拟合至Michaelis-Menten方程确定kcat和Km
- 参考文献:[1] Journal of the American Chemical Society, 1953, vol. 75, p. 4058;[2] Journal of Biological Chemistry, 1952, vol. 194, p. 455,458;[3] Journal of the American Chemical Society, 1951, vol. 73, p. 4604;[4] Bulletin of the Agricultural Chemical Society of Japan, 1957, vol. 21, p. 235,237;[5] Bioscience, biotechnology, and biochemistry, 1992, vol. 56, # 9, p. 1392 - 1395