五氟苯酚生物素酯用于生物分子的化学修饰，通过与生物素连接实现对生物分子的标记、标签化和报告分子的共价连接，在生物化学、分子生物学和诊断学领域作为工具用于检测生物样品中的靶组分和分离靶分子，利用生物素-抗生物素蛋白/链霉抗生物素蛋白系统实现特异性结合，可将荧光染料、酶或EM标记物附着到生物分子上。
生物分子化学修饰; 标记与检测; 生物化学; 分子生物学; 诊断学
路线1：EDC·HCl催化法
- 原料：生物素（2.95g，12.00mmol）、五氟苯酚（Pfp-OH，2.80g，15.20mmol）、EDC·HCl（5.70g，29.70mmol）、DMF（10mL+15mL）
- 步骤：将生物素溶解于DMF（10mL）中，加入Pfp-OH；在0℃下，将EDC·HCl的DMF溶液（15mL）经30分钟滴加至混合物中；滴加完毕后，室温氮气氛围搅拌过夜；反应完成后用DCM洗涤产物，得白色粉末。
- 条件：0-20℃；氮气氛围；DMF溶剂
- 收率：90%（4.50g）
- 参考文献：[1] Synthetic Communications, 1996, vol.26, #13, p.2531-2547；[2] Journal of the American Chemical Society, 2009, vol.131, p.7954-7955；[3] 等
路线2：吡啶催化法
- 原料：生物素（5g，23.1mmol）、五氟苯基三氟乙酸盐（PFP-TFA，7.50g，25.4mmol）、吡啶（2.07ml，25.4mmol）、DMF（50ml）
- 步骤：将生物素悬浮于DMF和吡啶中，搅拌5分钟后加入PFP-TFA；搅拌过夜后蒸发溶剂，残余物溶于乙醚悬浮，过滤并用乙醚冲洗滤饼。
- 条件：0.08h反应；DMF溶剂；吡啶催化剂
- 收率：81%（7.106g）
- 参考文献：[1] Organic Letters, 2013, vol.15, #6, p.1406-1409；[2] Patent: US9266902, 2016, B2；[3] 等
路线3：EDC·HCl催化法（重复验证）
- 原料：D-生物素（2.95g，12.00mmol）、Pfp-OH（2.80g，15.20mmol）、EDC·HCl（5.70g，29.70mmol）、DMF（10mL+15mL）
- 步骤：生物素溶解于DMF（10mL），加入Pfp-OH；0℃下滴加EDC·HCl的DMF溶液（15mL）30分钟；室温氮气搅拌过夜；DCM洗涤得白色粉末。
- 条件：0℃滴加，室温反应；氮气氛围；DMF溶剂
- 收率：90%（4.50g）
- 1H NMR（D2O）：δ 1.41-1.69（m，6H，CH2），2.57（d，1H，CH2），2.77-2.85（m，3H，CH2），3.11-3.12（m，1H，CH），4.14（t，1H，CH），4.30（t，1H，CH），6.37（d，2H，NH）
- 参考文献：[1] Synthetic Communications, 1996, vol.26, #13, p.2531-2547；[2] Journal of the American Chemical Society, 2009, vol.131, p.7954-7955；[3] 等
